測(cè)定血清中的某些酶,如CK,離體(采集血液)后很容易失活。失活的原因是酶活性中心的活性基因巰基(一SH)被氧化造成的。只有通過(guò)適當(dāng)?shù)倪€原作用才能重新開(kāi)始。如CK—NAC檢測(cè)試劑盒即含有CK活化劑,名為N一乙酰半胱氨酸。實(shí)驗(yàn)研究證明,NAC對(duì)血清中已失活的CK活化過(guò)程約需180 S。這就是CK測(cè)定為什么要延遲時(shí)間較長(zhǎng)的理論依據(jù)。在AST,ALT采用IFCC推薦方法測(cè)定時(shí)需要磷酸吡哆醛預(yù)活化。需要強(qiáng)調(diào):含有活化劑的生化試劑,其測(cè)定酶活性的結(jié)果要高些。用pH計(jì)測(cè)定配制好的鹽溶液的pH值,使其在6.4~7.0之間。明膠水溶液(10%,無(wú)菌)
檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)如何改進(jìn)錯(cuò)誤?查驗(yàn)技術(shù)人員應(yīng)具有試驗(yàn)室操作的基本素質(zhì)和實(shí)踐經(jīng)驗(yàn)。檢測(cè)技術(shù)人員能夠嫻熟操作試驗(yàn)儀器儀表,具有必定的總結(jié)和剖析問(wèn)題的能力,能及時(shí)、妥善地解決檢測(cè)試劑盒試驗(yàn)中呈現(xiàn)的意外狀況。洗刷要徹底。洗版不徹底,酶偶聯(lián)物的布景色彩為假陽(yáng)性。此外,清潔劑應(yīng)該是新鮮的,能夠隨時(shí)使用。舊的洗刷劑會(huì)添加布景,也可能呈現(xiàn)假陽(yáng)性。嚴(yán)控劑盒試驗(yàn)反應(yīng)時(shí)間。檢測(cè)試劑盒反應(yīng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng),酶被滅活,反應(yīng)時(shí)間過(guò)短,酶與血清中的微生物抗原和抗體不能徹底結(jié)合,產(chǎn)物結(jié)構(gòu)松散不穩(wěn)定,易清洗,易發(fā)生假陰性。明膠水溶液(10%,無(wú)菌)檢測(cè)試劑盒使液體充沛混合均勻,也使其得到充沛的反應(yīng)。
hochest染色和DAPI染色有什么區(qū)別:1、每個(gè)染料有自己獨(dú)特的激發(fā)譜線和發(fā)射譜線.這也是以上兩個(gè)染料的主要區(qū)別. 另外Hoechest 33258 是膜透性的,因此在活細(xì)胞時(shí)候能輕松進(jìn)入;DAPI是半透性的,有選擇性的進(jìn)入.因此Hoechest 33258 一般用來(lái)染活細(xì)胞,可以長(zhǎng)驅(qū)直入;DAPI一般是染固定細(xì)胞.2、兩者都可以用紫外看,參見(jiàn)以下的激發(fā)發(fā)射波長(zhǎng)Hoechst 33258的較大激發(fā)波長(zhǎng)為346nm,較大發(fā)射波長(zhǎng)為460nm;Hoechst 33258和雙鏈DNA結(jié)合后,較大激發(fā)波長(zhǎng)為352nm,較大發(fā)射波長(zhǎng)為461nm。DAPI的較大激發(fā)波長(zhǎng)為340nm,較大發(fā)射波長(zhǎng)為488nm;DAPI和雙鏈DNA結(jié)合后,較大激發(fā)波長(zhǎng)為364nm,較大發(fā)射波長(zhǎng)為454nm。
用液體試劑時(shí)要注意什么?在試管里進(jìn)行某些實(shí)驗(yàn)時(shí),取試劑不需要準(zhǔn)確用量,只要學(xué)會(huì)估計(jì)取用液體的量即可。例如用滴管取用液體,lmL相當(dāng)多少滴,5mL液體占一個(gè)試管容量的幾分之幾等。倒入試管里溶液的量,一般不超過(guò)其容積的1/3。定量取用液體時(shí),用量筒或移液管。量筒用于量度一定體積的液體,可根據(jù)需要選用不同容量的量筒。量取液體后讀數(shù)時(shí),要使視線與量筒內(nèi)液體的彎月面的低處保持水平,偏高或偏低都會(huì)讀不準(zhǔn)而造成較大的誤差。磷酸緩沖鹽溶液可調(diào)整的適宜pH緩沖作用。
檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):檢測(cè)試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間建議控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排加樣。請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,建議做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔第yi孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。液體試劑分散度大,吸收快。甘油明膠浮載劑
檢測(cè)試劑盒操作注意事項(xiàng):實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。明膠水溶液(10%,無(wú)菌)
檢測(cè)試劑盒標(biāo)本保存方法:標(biāo)本管中增加物質(zhì)的影響。抗凝劑、酶抑制劑及快速分別血清的分別膠等均對(duì)測(cè)定有必定煩擾作用。標(biāo)本溶血。由于各種人為原因引起的標(biāo)本溶血,均可因紅細(xì)胞破壞溶解時(shí)釋放出很多具有過(guò)氧化物酶活性的血紅蛋白,在以辣根過(guò)氧化物酶為符號(hào)的測(cè)定中,會(huì)導(dǎo)致非特異性顯色,檢測(cè)試劑盒煩擾測(cè)定作用。為打敗上述煩擾作用,標(biāo)本搜集時(shí)有必要留意避免溶血。標(biāo)本保存不妥。 在冰箱中保存過(guò)久的標(biāo)本,血清中IgG可聚組成多聚體、AFP可構(gòu)成二聚體,在間接法測(cè)定中會(huì)導(dǎo)致本底過(guò)深、乃至形成假陽(yáng)性;標(biāo)本放置時(shí)刻過(guò)長(zhǎng)(如一日以上),有時(shí)抗原或抗體免疫活性削弱,亦可出現(xiàn)假陰性。為打敗上述煩擾,測(cè)定的血清標(biāo)本宜為新鮮搜集;如不能立即測(cè)定,5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可存放于4℃,1周后測(cè)定的血清標(biāo)本應(yīng)低溫凍存;凍存后融解的標(biāo)本,蛋白質(zhì)部分濃縮,分布不均,應(yīng)充沛混合后再測(cè)定,但混勻時(shí)應(yīng)輕柔,不行激烈振蕩。明膠水溶液(10%,無(wú)菌)