BMC原代分離步驟：1) 抽取人的外周血于肝素抗凝管中，取足5mL新鮮血液，加入PBS按1：1稀釋血液（一般**管2mL+2mL）。2) 取淋巴細(xì)胞分離液5mL于15mL滅菌離心管中待用。3) 吸取稀釋血液，在離分層液上方1cm處，沿試管壁徐徐加入，使稀釋血液重疊于分層液上，并與分離液形成明顯界面。4) 室溫，離心2000rpm，20min。此時離心管中形成5層：較上面是血漿，血漿層和淋巴細(xì)胞分離液之間是淋巴細(xì)胞層呈白膜狀。5) 小心吸取中間呈白膜狀的單個核細(xì)胞層，盡量全部吸出單個核細(xì)胞。加5倍以上體積的PBS洗2次，每次離心1500rpm，10min。殺滅曲線的建立：按照每2天進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)，來確定殺滅未轉(zhuǎn)染細(xì)胞的恰當(dāng)濃度。Orth固定液

Laemmli 加樣緩沖液(2×)是一種以溴酚藍(lán)為染料的 2 倍濃縮的蛋白上樣緩沖液，主要 由 2-ME、SDS、溴酚藍(lán)、Laemmli 分層緩沖液等組成，可用于不連續(xù)蛋白電泳的上樣。 組成： 編號 名稱 PE0005 5ml Storage Laemmli 加樣緩沖液(2×) 使用說明書 4℃ 1份 操作步驟(光供參考)： 1、 取適量的蛋白樣品和 Laemmli 加樣緩沖液(2×)等量混合，充分混勻。 2、 直接上樣到 SDS-PAGE 膠加樣孔內(nèi)即可。 3、 通常電泳至藍(lán)色染料到達(dá) PAGE 膠的底部附近即可停止。 注意事項(xiàng)： 1、 Leagene Laemmli 加樣緩沖液(2×)中含少量β-巰基乙醇，有輕微刺激性氣味。 2、 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。 有效期： 12 個月有效。亦可室溫短期保存。pH標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液(pH=2.00)殺滅曲線的建立：每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

人外周血單核細(xì)胞（PBMC）分離：PBMC（peripheral blood mononuclear cell），外周血單個核細(xì)胞，顧名思義，其主要細(xì)胞類型為血液里邊具有單個核的細(xì)胞，主要包括淋巴細(xì)胞（Ｔ/Ｂ），單核細(xì)胞，吞噬細(xì)胞，樹突狀細(xì)胞和其他少量細(xì)胞類型。其中淋巴細(xì)胞占很大一部分。分離ＰＢＭＣ的主要目的是為了將多核細(xì)胞和紅細(xì)胞去除，收集單個核細(xì)胞，從而能夠很方便地模擬體外的血液免疫環(huán)境。臍帶血單個核細(xì)胞（MNC）分離臍血是指胎兒出生時臍帶內(nèi)及胎盤近胎兒一側(cè)血管內(nèi)的血液，含有豐富的干細(xì)胞和祖細(xì)胞，主要包含造血干細(xì)胞和間充質(zhì)干細(xì)胞。臍血MNC能治好多種病種，包括：神經(jīng)系統(tǒng)疾病，呼吸系統(tǒng)疾病，消化系統(tǒng)疾病，心臟疾病，內(nèi)分泌疾病以及小兒腦癱等。用于簡便、高效地提取臍血單個核細(xì)胞。

主要試劑配制：（1）PBS：PBS粉劑每袋加ddH2O定容至1000mL，調(diào)pH7.2，高壓滅菌，4℃保存?zhèn)溆?。?）RPIM-1640培養(yǎng)基：臨用前根據(jù)需要加15%胎牛血清，較后按1%體積分?jǐn)?shù)加入雙抗貯存液(青霉素+鏈霉素)，使青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100 U/mL，置于4℃冰箱保存。（3）臺盼藍(lán)染液：稱取4g臺盼藍(lán)，于研缽中用少量雙蒸水研磨，加雙蒸水至100mL，1500rpm離心15min，吸取上層液，即為4%水溶液。用前，用1.8%氯化鈉溶液稀釋1倍，即為2%臺盼藍(lán)染液。丁胺卡那霉素給藥說明：不可直接靜脈推注，以免產(chǎn)生神經(jīng)肌肉阻滯和呼吸克制作用。

pH緩沖溶液的類型與作用：pH緩沖溶液包括兩大類：標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液和普通緩沖溶液。標(biāo)準(zhǔn)緩沖溶液主要用在酸度計(jì)測量溶液pH值時的儀器校正和定位，要求數(shù)值準(zhǔn)確、精確。因此對試劑純度、濃度準(zhǔn)確性、溫度等都有嚴(yán)格要求，這類緩沖溶液有專門的化學(xué)試劑商品，可以購買配制，也可以用優(yōu)級純試劑按資料的配比配制。普通緩沖溶液主要用于化學(xué)分析和儀器分析中要控制一定pH值的測定過程中。幾乎所有的EDTA絡(luò)合滴定都必須在一定的pH范圍內(nèi)進(jìn)行，因此，需要加入pH緩沖溶液，例如，測定鉛、鋅用到HAc緩沖溶液，測定鈣、鎂、鋅用到氨緩沖溶液。又如，氧化還原滴定中，碘量法測銅要用到NH4HF2，碘量法測砷、銻要加NaHCO3。青霉素和鏈霉素的終濃度分別為100 U/mL和100 U/mL，置于4℃冰箱保存。肉桂酸-4-羥基化酶(C4H)提取試劑

氨芐青霉素溶液配置：稱取5g Ampicillin置于50ml塑料離心管中。Orth固定液

利福平溶液片有什么作用：【性狀】本品滴丸為暗紅色，緩沖液為無色澄明溶液。 【作用類別】 【藥理毒理】利福平為半合成廣譜殺菌劑，與依賴于DNA的RNA多聚酶的β亞單位牢固結(jié)合，克制細(xì)菌RNA的合成，防止該酶與DNA連接，從而阻斷RNA轉(zhuǎn)錄過程。 【藥代動力學(xué)】利福平為脂溶性，易于進(jìn)入敏感菌細(xì)胞內(nèi)殺死敏感菌。眼部給藥吸收后可彌散至大部分體液和組織中，本品在肝臟中可被自身誘導(dǎo)微粒體氧化酶作用而迅速去乙?；蔀榫哂锌司钚缘拇x物，然后經(jīng)水解形成無活性的代謝物由尿排出。本品主要經(jīng)膽汁和腸道排出，亦可經(jīng)乳汁排出。利福平不能經(jīng)血液透析或腹膜透析除去。Orth固定液