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ER培養(yǎng)基

來源: 發(fā)布時間:2021-11-06

丁胺卡那霉素功能與主治:①本品適用于綠膿桿菌及其他假單胞菌屬、大腸桿菌、變形桿菌(吲哚陽性和吲哚陰性)、普魯威登菌、克雷伯菌、腸桿菌、沙雷菌屬、不動桿菌屬與葡萄球菌屬等所致的菌血癥、細(xì)菌性心內(nèi)膜炎、敗血癥(包括新生兒膿毒癥)、呼吸道傳染、骨關(guān)節(jié)傳染、神經(jīng)系統(tǒng)傳染(包括腦膜炎)、皮膚軟組織傳染、膽道傳染、腹腔傳染(包括腹膜炎)、燒傷、手術(shù)后傳染(包括血管外科手術(shù)后傳染)及復(fù)發(fā)性尿路傳染等。②阿米卡星不宜用于單純性尿路傳染初治病例,除非致病菌對其他毒性較低的克菌藥均不敏感。③阿米卡星對大部分氨基糖苷類純化酶穩(wěn)定,故適用于治好革蘭陰性桿菌中卡那霉素、慶大霉素或妥布霉素耐藥菌株,尤其如普魯威登菌屬、粘質(zhì)沙雷菌和綠膿桿菌所致傳染。氨芐青霉素溶液配置:加入40ml滅菌水,充分混合溶解之后定容至50ml。ER培養(yǎng)基

ER培養(yǎng)基,液體試劑

加藥時間:由于基因轉(zhuǎn)染到細(xì)胞內(nèi)之后要一段時間才能表達(dá)出蛋白質(zhì)。所以篩選不能太早;但是也不能太晚,因為轉(zhuǎn)染了外源基因的細(xì)胞代謝負(fù)荷較大,增值較慢,時間長了就會被沒有外源基因轉(zhuǎn)入的細(xì)胞所淹沒,終導(dǎo)致篩選不出陽性克隆,一般要在轉(zhuǎn)染24小時之后才開始加G418篩選。隨著細(xì)胞的代謝G418的濃度和活性都回下降,所以每3~5天都要更換一次含有G418的篩選液。這時藥物濃度可以降至200ug/ml。培養(yǎng)液:加藥篩選約6天左右,細(xì)胞會大量死亡,孔中只剩下的細(xì)胞。這時會出現(xiàn)兩個問題:1.死亡的細(xì)胞會裂解釋放出有害物質(zhì),導(dǎo)致那些有neo表達(dá)的陽性細(xì)胞死亡,即非選擇性死亡。2.孔中細(xì)胞數(shù)目很少,細(xì)胞之間的信號會變得很弱,也會導(dǎo)致陽性細(xì)胞的狀態(tài)不佳甚至死亡。這個時候需要一種特殊的培養(yǎng)液:假如你要轉(zhuǎn)染3T3細(xì)胞,在3T3細(xì)胞匯合度達(dá)到80%的時候,換液,培養(yǎng)過夜之后收集培養(yǎng)液,通過濾器消毒,和新鮮的培養(yǎng)液按1:1混合備用。再轉(zhuǎn)染后篩選過程中就可以應(yīng)用這種培養(yǎng)基。ER培養(yǎng)基室溫條件,水平轉(zhuǎn)子離心400g,離心30-40min,可見細(xì)胞分層。

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G418又稱遺傳霉素,新霉素,對細(xì)菌、酵母、高等植物、原生生物、哺乳動物細(xì)胞具有氨基苷類毒性,對真核細(xì)胞進(jìn)行篩選。G418(G418,G 418,G-418,Geneticin)是一種氨基糖苷類 ,這種氨基糖類的結(jié)構(gòu)和新霉素、慶大霉素、卡那霉素相似,在分子遺傳試驗中,是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常用的抗性篩選試劑。它通過克制轉(zhuǎn)座子Tn601,Tn5的基因,干擾核糖體功能而阻斷蛋白質(zhì)合成,對原核和真核等細(xì)胞產(chǎn)生東西,包括細(xì)菌、酵母、植物和哺乳動物細(xì)胞 ,也包括原生動物和蠕蟲。當(dāng)neo基因被整合進(jìn)真核細(xì)胞DNA后 ,則能啟動neo基因編碼的序列轉(zhuǎn)錄為mRNA ,從而獲得抗性產(chǎn)物氨基糖苷磷酸轉(zhuǎn)移酶的表達(dá) ,使細(xì)胞獲得抗性而能在含有G418的選擇性培養(yǎng)基中生長。G418的這一選擇特性 ,已在基因轉(zhuǎn)移、基因敲除、抗性篩選以及轉(zhuǎn)基因動物等方面得以普遍應(yīng)用。

兩性霉素B溶液(10mg/ml):注意事項:兩性霉素B作用原理在于其與菌類細(xì)胞膜上的Ergosterol結(jié)合導(dǎo)致細(xì)胞膜通透性發(fā)生變化,使菌類細(xì)胞內(nèi)鉀離子、氨基酸通透到到膜外,破壞菌類正常代謝,進(jìn)而使菌類細(xì)胞死亡。儲存條件:4℃,避光,12個月。兩性霉素B又稱廬山霉素,是從鏈霉菌(Streptomycesnodosus)的培養(yǎng)液中分離而得的一種多烯類克菌類,其抑菌機(jī)制是能與菌類細(xì)胞膜上的麥角甾醇結(jié)合,導(dǎo)致細(xì)胞膜受損,通透性提高,細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外漏,破壞正常代謝而起抑菌作用。細(xì)菌因其細(xì)胞膜上不含麥角甾醇成分,故無效。兩性霉素B克菌類譜廣,幾乎對絕大部分菌類均有效,耐藥菌株少見,高濃度時呈殺菌作用。兩性霉素B溶液在室溫不穩(wěn)定,易被光、熱和酸破壞,在pH6.0~7.5下克菌作用很好。殺滅曲線的建立:每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

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緩沖溶液的配制和應(yīng)用:為了配制一定pH的緩沖溶液,首先選定一個弱酸,它的pKaφ盡可能接近所需配制的緩沖溶液的pH值,然后計算酸與堿的濃度比,根據(jù)此濃度比便可配制所需緩沖溶液。以上主要以弱酸及其鹽組成的緩沖溶液為例說明它的作用原理、pH計算和配制方法。對于弱堿及其鹽組成的緩沖溶液可采用相同的方法。緩沖溶液在物質(zhì)分離和成分分析等方面應(yīng)用普遍,如鑒定Mg2 離子時,可用下面的反應(yīng):白色磷酸銨鎂沉淀溶于酸,故反應(yīng)需在堿性溶液中進(jìn)行,但堿性太強(qiáng),可能生成白色Mg(OH)2沉淀,所以反應(yīng)的pH值需控制在一定范圍內(nèi),因此利用NH3·H2O和NH4Cl組成的緩沖溶液,保持溶液的pH值條件下,進(jìn)行上述反應(yīng)。丁胺卡那霉素給藥說明:燒傷患者中本品的半衰期較短(1—1.5小時)。ER培養(yǎng)基

固體試劑的取用:藥匙每取完一種試劑后都必須用干凈的紙擦拭干凈。ER培養(yǎng)基

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